Oxford Nanopore丨人转录组direct RNA测序数据首发

继基于Oxford Nanopore测序技术的人全基因组数据发布后,人转录组RNA直接测序数据也已于2017年11月30日在github上发布[1]。此前已为大家分享过全基因组数据分析结果(Nanopore测序组装人类基因组初探),今天组学君为大家呈上Nanopore除了ultra-long reads之外另一个amazing的创新点–direct RNA测序应用于人转录组的研究。

材料:GM12878人细胞系RNA
方法:1. direct RNA 测序30 flowcells(建库测序方式见如下示意图)

2. 反转成cDNA测序12 flowcell

测序平台:Oxford Nanopore MinION

结论

01

direct RNA测序能够评估poly-A的长度

poly-A的长度属于可变聚腺苷酸化(APA)的一种,可能与mRNA的稳定性和3’UTR区参与基因表达调控机制相关[2],Nanopore direct RNA测序能够评估poly-A长度,为研究3’UTR区的重要生物学意义提供一种新方法。

通过在Nanopore direct RNA测序时添加已知参照物SIRV,并对其进行polyA长度分析,中值在20-30nt之间,与预期相符,说明使用Nanopore direct RNA测序评估polyA长度的方法有着很高的准确度。

02

direct RNA测序能完整重构isoform,为研究可变剪接、融合基因提供基础

发布数据的链接中[1],展示了利用Nanopore技术测序对人转录组中Dystonin gene和p53gene进行外显子连接和isoform重构。

03

direct RNA测序能直接检测RNA表观修饰

RNA的表观修饰研究的兴起,可能也就是近5年的事情,gold rush才刚刚开始[3]。与以往其它技术不同,direct RNA测序能够直接将RNA表观修饰的信息以电流变化信号记录下来,通过相关算法来识别。发布数据的链接中[1],展示了在E. coli 16s rRNA中检测到m7G 和假尿苷修饰的证据。

研究人员期望通过direct RNA测序将RNA所有的表观修饰准确地检测出来,包括tRNA。

参考文献和链接

[1]https://github.com/nanopore-wgs-consortium/NA12878/blob/master/RNA.md

[2]Subtelny, Alexander O., et al. “Poly (A)-tailprofiling reveals an embryonic switch in translational control.” Nature508.7494 (2014): 66-71.

[3]Willyard, Cassandra.”An epigenetics gold rush: new controls for gene expression.” Nature542.7642 (2017): 406-408.

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